細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)服務(wù)
使用說(shuō)明書(shū)
僅供體外研究使用,不用于臨床診斷!
第1版(2016年04月修訂)
【服務(wù)內(nèi)容】
細(xì)胞克隆形成率即細(xì)胞接種存活率,表示接種細(xì)胞后貼壁的細(xì)胞成活并形成克隆的數(shù)量。貼壁后的細(xì)胞不一定每個(gè)都能增殖和形成克隆,而形成克隆的細(xì)胞必為貼壁和有增殖活力的細(xì)胞??寺⌒纬陕史从臣?xì)胞群體依賴(lài)性和增殖能力兩個(gè)重要性狀。
【項(xiàng)目和周期】
項(xiàng)目?jī)?nèi)容:
1、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的各組細(xì)胞,分別用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成單個(gè)細(xì)胞,并把細(xì)胞懸浮在10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中備用。
2、將細(xì)胞懸液作梯度倍數(shù)稀釋?zhuān)拷M細(xì)胞分別以每皿100或200個(gè)細(xì)胞的梯度密度分別接種含37℃預(yù)溫培養(yǎng)液的皿中或者6孔板中,并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng),使細(xì)胞分散均勻。置37℃ 5% CO2及飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2~3周。
3、經(jīng)常觀察,當(dāng)出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的克隆時(shí),終止培養(yǎng)。加4%多聚甲醛固定細(xì)胞5mL固定15分鐘。然后去固定液,加適量吉姆薩染色液染10~30分鐘,然后用流水緩慢洗去染色液,空氣干燥。
4、將平皿在顯微鏡(低倍鏡)計(jì)數(shù)大于10個(gè)細(xì)胞的克隆數(shù)。最后計(jì)算克隆形成率。
克隆形成率 =(克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù))×100%。
周期:2~3周
【客戶(hù)提供的材料】
1.待檢測(cè)或處理的細(xì)胞;如果常見(jiàn)的人和大小鼠細(xì)胞系,公司可免費(fèi)提供。
2.細(xì)胞處理的相關(guān)藥物和實(shí)驗(yàn)方案;
【反饋給客戶(hù)結(jié)果】
1、提供相應(yīng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和圖表;
2、提供具體的實(shí)驗(yàn)報(bào)告;