無血清293細(xì)胞培養(yǎng)基

使用說明書

僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!

第1版（2016年04月修訂）

[關(guān)聯(lián)信息]

無血清293細(xì)胞培養(yǎng)基適用于懸浮培養(yǎng)條件下的HEK293細(xì)胞（如293-F，293-T，Expi-293F等）的高密度生長和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染表達(dá)。無血清293細(xì)胞培養(yǎng)基含有細(xì)胞生長所需的全部營養(yǎng)成份，無需添加任何添加物即可使用。無血清293細(xì)胞培養(yǎng)基的基本信息如下表所示：

外觀：	澄清透明紅色液體
滲透壓：	275±15 mOSM
pH：	6.9-7.4
無菌檢測(cè)：	無菌
內(nèi)毒素：	<5 EU/mL

[制品內(nèi)容]

編號(hào)	名稱	規(guī)格
IS91-1	無血清293細(xì)胞培養(yǎng)基	100ml
IS91-2	無血清293細(xì)胞培養(yǎng)基	2*500ml

[儲(chǔ)存及有效期]

2-8℃避光保存，有效期一年。

[使用方法]

以下步驟僅供參考

（一）細(xì)胞馴化

1）直接馴化

大部分情況下，培養(yǎng)于其他培養(yǎng)基中的細(xì)胞，可以直接適應(yīng)無血清293細(xì)胞培養(yǎng)基，只要按照日常傳代方式（稀釋）更換培養(yǎng)基即可。

2）漸進(jìn)式馴化

注意：選用低代次、處于對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行馴化

①在原培養(yǎng)基中復(fù)蘇細(xì)胞并繼續(xù)使用該培養(yǎng)基傳代2到3次至細(xì)胞生長穩(wěn)定，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到2x10⁶ cells/ml后進(jìn)行傳代，傳代細(xì)胞密度控制在0.5-0.6×10⁶ cells/mL，5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與無血清293細(xì)胞培養(yǎng)基的比例為75:25；

②將細(xì)胞置于37℃，5% CO2，轉(zhuǎn)速為110-175 rpm的恒溫?fù)u床中進(jìn)行培養(yǎng)；

③當(dāng)細(xì)胞密度3-4天后達(dá)到3x10⁶ cells/ml且細(xì)胞活率>90%，傳代時(shí)5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與無血清293細(xì)胞培養(yǎng)基的比例為50:50，細(xì)胞密度控制在0.5×10⁶ cells/mL。如細(xì)胞生長慢，可離心上清，留20%條件培養(yǎng)基，加入80%的5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與無血清293細(xì)胞培養(yǎng)基比例為75:25的混合培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)；

④重復(fù)步驟③逐步增加無血清293細(xì)胞培養(yǎng)基所占的比例（5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與無血清293細(xì)胞培養(yǎng)基的比例為25:75至10:90）直到100%的無血清293細(xì)胞培養(yǎng)基；

⑤經(jīng)過在100%的無血清293細(xì)胞培養(yǎng)基中的幾次傳代培養(yǎng)，傳代后3-4天細(xì)胞的密度可以達(dá)到2-3×10⁶ cells/mL，細(xì)胞存活率大于90%，這說明細(xì)胞已經(jīng)完全適應(yīng)了無血清293細(xì)胞培養(yǎng)基。之后進(jìn)行細(xì)胞的傳代培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞的起始密度可以降到0.3×10⁶cells/mL，一般傳代2-3次后再進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。

注意: 一般細(xì)胞馴化過程中，前三代細(xì)胞的狀態(tài)可能不是很好，但一般從第四代開始狀態(tài)會(huì)有改善。

（二）細(xì)胞傳代

1）取細(xì)胞培養(yǎng)樣品，人工或儀器測(cè)定細(xì)胞密度以及活率；

2）計(jì)算傳代所需的細(xì)胞用量，建議起始細(xì)胞密度為0.2-0.4×10⁶ cells/mL。建議復(fù)蘇的細(xì)胞至少培養(yǎng)兩代后再用于其他用途。傳代培養(yǎng)體積建議15-20 mL（100 mL的培養(yǎng)瓶）或50-60 mL（250 mL 的培養(yǎng)瓶）；

3）將細(xì)胞置于37℃，5%CO2，轉(zhuǎn)速為110-175 rpm的恒溫?fù)u床中進(jìn)行培養(yǎng)，3-4天傳代一次。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染在無血清293細(xì)胞培養(yǎng)基中，采用商業(yè)化轉(zhuǎn)染試劑（例如ExpiFectamine? 293 Transfection Kit）或PEI可以實(shí)現(xiàn)對(duì)HEK293細(xì)胞的高效轉(zhuǎn)染。

[注意事項(xiàng)]

1、取液或者分裝需在超凈工作臺(tái)，防止污染物進(jìn)入；

2、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作并嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室安全操作手冊(cè)進(jìn)行。