總抗氧化能力檢測試劑盒A015-2）

使用說明書

僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!

第1版（2016年04月修訂）

[預(yù)期應(yīng)用] 

本試劑盒利用ABTS法測血清、血漿、組織勻漿，細(xì)胞，細(xì)胞上清中總抗氧化能力（T-AOC）。

[試劑盒內(nèi)容]

試劑	數(shù)量(96T)	試劑	數(shù)量(96T)
Reagent 1	1×20ml	Reagent 4	1×0.2ml
Reagent 2	1×1ml	Reagent 5	1×0.1ml
Reagent 3	1×0.5ml	說明書	1

[需自備的設(shè)備及試劑]

405-425nm濾光片的酶標(biāo)儀

 

[試劑盒的儲(chǔ)存及有效期]

1. Reagent 1：緩沖液溶液,  -20^oC可保存6個(gè)月。              

2. Reagent 2：ABTS原溶液, -20^oC可保存6個(gè)月, 需避光保存。              

3. Reagent 3：H₂O₂溶液， -20^oC避光可保存6個(gè)月。             

4. Reagent 4：過氧化物酶溶液，-20^oC避光可保存6個(gè)月。            

5. Reagent 5：10mM Trolox溶液, -20^oC可保存6個(gè)月, 需避光保存。   

               

[試劑準(zhǔn)備]

1. 試劑3溶液配制：將雙蒸餾水（DWW）稀釋至原來體積的1000倍。

2. ABTS溶液制備：混合試劑1、試劑2和3溶液，比例為76:5:4，按需求量配置ABTS溶液。ABTS溶液應(yīng)在沒有光照的室溫下保存，在30分鐘內(nèi)使用。

3. 試劑4溶液制備：用試劑1稀釋試劑4至其原始體積的10倍。試劑4溶液應(yīng)在使用前按所需量配制。

 

[標(biāo)本處理]

1. 血漿/血漿等液體樣本              

預(yù)處理：直接檢測。注意，制備血漿樣品，不推薦使用EDTA作為抗凝劑。         

     

2. 組織樣本              

預(yù)處理：準(zhǔn)確稱量樣品，按比例加入生理鹽水，如1g樣品加入9g生理鹽水。在冰上勻漿，于4^oC，12000 rpm/min 離心5min ，取上清液用于實(shí)驗(yàn)。              

 

3. 細(xì)胞              

預(yù)處理：收集不少于100萬個(gè)細(xì)胞，加入200μL預(yù)冷磷酸鹽緩沖液。通過均漿或超聲處理破細(xì)胞，于4℃、12000 rpm/min離心5min，取上清液用于實(shí)驗(yàn)。              

注意：對(duì)于組織樣本和細(xì)胞，需檢測總蛋白濃度。建議使用IS003 BCA蛋白定量檢測試劑盒測定蛋白質(zhì)濃度。

 

[操作步驟]

操作表

	空白	標(biāo)準(zhǔn)	樣本
雙蒸水(μl)	10
Trolox 溶液 (μl)		10
樣本 (μl)			10
試劑4溶液 (μl)	20	20	20
ABTS 溶液 (μl)	170	170	170
室溫反應(yīng)6分鐘，在414nm波長測量各孔O.D.值。

注：建議用雙蒸水將Trolox 溶液稀釋至0.15、0.3、0.6、0.9、1.2和1.5mM，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

 

[實(shí)驗(yàn)原理]

ABTS在適當(dāng)?shù)难趸瘎┳饔孟卵趸删G色的ABTS·+，在抗氧化物存在時(shí)，ABTS·+的產(chǎn)生會(huì)被抑制，在 405nm或 734nm測定ABTS·+的吸光度即可測定并計(jì)算出樣品的總抗氧化能力。Trolox是一種V_E的類似物，具有和V_E相近的抗氧化能力，用作其它抗氧化物總抗氧化能力的參考。例如，Trolox的總抗氧化能力為 1，相同濃度情況下，其它物質(zhì)的抗氧化能力用其抗氧化能力和Trolox相比的倍數(shù)來表示。

 

[下載]

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