總抗氧化能力檢測(cè)試劑盒(A015-1)
使用說明書
僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!
第1版（2016年04月修訂）
[預(yù)期應(yīng)用]
本試劑盒可測(cè)血清、血漿、組織，植物提取液等樣本中總抗氧化能力（T-AOC）。
機(jī)體防御體系的抗氧化能力的強(qiáng)弱與健康程度存在著密切聯(lián)系。該防御體系包括酶促體系與非酶促體系。許多酶是以微量元素為話性中心，例如:超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX）、過氧化氫酶(CAT). 谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移商(GST)等，非酶促反應(yīng)體系中主要為維生素、氨基酸和金屬蛋白質(zhì)。例如，VE、胡蘿卜素、VC、半胱氨酸、蛋氨服、色氨被、組氨酸、葡萄糖、銅蘭蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、乳鐵蛋白等。這個(gè)體系的防護(hù)氧化作用主要通過三條途徑。(1)消除自由基和活性氧以免引發(fā)脂質(zhì)過氧化: (2)分解過氧化物，阻斷過氧化鏈。(3)除去起催化作用的金屬離子。防御體系各成份之間相互起到了協(xié)同作用，以及代償作用與依賴作用。
[試劑盒內(nèi)容]
試劑 | 數(shù)量(96T/48T) | 試劑 | 數(shù)量(96T/48T) |
Reagent 1 | 2×60ml/1×60ml | Reagent 4 | 1×24ml/1×12ml |
Reagent 2 | 2/1 | Reagent 5 | 1×24ml/1×12ml |
Reagent 3 | 1×5ml/1×3ml | 說明書 | 1 |
Reagent 3稀釋液 | 1×60ml/1×30ml |
[需自備的設(shè)備及試劑]
1、分光光度計(jì)（比色測(cè)定波長(zhǎng)為520nm）
2、恒溫水浴箱或恒溫箱（孵育溫度：37℃和90～100℃）
3、臺(tái)式離心機(jī)
4、微量移液器及吸頭
5、漩渦混合儀
6、蒸餾水或去離子水
[試劑盒的儲(chǔ)存及有效期]
試劑盒2-8℃可保存6個(gè)月
1. Reagent 1：無色液體, 2-8℃保存。
2. Reagent 2：白色晶體, 2-8℃避光保存。
3. Reagent 3：黃色溶液， -20℃避光可保存1年。
4. Reagent 3稀釋液：2-8℃保存。
5. Reagent 4：無色粘稠液體，室溫保存。
6. Reagent 5：無色液體, 室溫保存。
[試劑準(zhǔn)備]
1. Reagent 2配制：使用時(shí)，加入120ml雙蒸餾水溶解（粉末難溶，可置于37℃加快溶解速度）。
2. Reagent 3工作液制備：用R3稀釋液按1：19的比例稀釋R3。建議在使用前按所需量配制。
[標(biāo)本處理]
1. 組織樣本
預(yù)處理：準(zhǔn)確稱量樣品，按比例加入生理鹽水，如1g樣品加入9g生理鹽水。在冰上勻漿，于4oC，12000 rpm/min 離心5min ，取上清液用于實(shí)驗(yàn)。
注意：對(duì)于組織樣本和細(xì)胞，需檢測(cè)總蛋白濃度。建議使用IS003 BCA蛋白定量檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。
2. 全血
收集抗凝全血（肝素為抗凝劑），輕輕顛倒充分抗凝后，可直接定量吸取全血，用冷雙蒸水按1：9比例制備溶血液，如取0.02ml全血，加入0.18ml雙蒸水，混勻后制備1：9全血稀釋液；也可定量吸取全血，轉(zhuǎn)入EP管，低溫凍存（溫度越低越好），測(cè)定之前解凍并按比例加入冷雙蒸水制成1：9全血稀釋液用于檢測(cè)。
注意：不推薦使用EDTA作為抗凝劑。
[操作步驟]
1. 血清/血漿 T-AOC 實(shí)驗(yàn)
操作表:
樣本管 (U) (ml) | 對(duì)照管 (C) (ml) | |
Reagent 1 | 1 | 1 |
血清/血漿 | a* | |
Reagent 2 | 2 | 2 |
| Reagent 3工作液 | 0.5 | 0.5 |
| 用漩渦混合儀混勻，37℃水浴30分鐘。 | ||
Reagent 4 | 0.1 | 0.1 |
血清/血漿 | a* | |
| 靜置10分鐘， 移液至比色皿（1cm light path）， 在520nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔O.D.值（用蒸餾水調(diào)零）。 | ||
* 推薦樣本量：血清/血漿, a*=0.1ml.
2. 組織T-AOC實(shí)驗(yàn)
操作表:
樣本管 (U) (ml) | 對(duì)照管 (C) (ml) | |
Reagent 1 | 1 | 1 |
10%組織勻漿 | a* | |
Reagent 2 | 2 | 2 |
| Reagent 3工作液 | 0.5 | 0.5 |
| 用漩渦混合儀混勻，37℃水浴30分鐘。 | ||
Reagent 4 | 0.2 | 0.2 |
| 10%組織勻漿 | a* | |
| Reagent 5 | 0.2 | 0.2 |
| 靜置10分鐘， 移液至比色皿（1cm light path）， 在520nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔O.D.值（用蒸餾水調(diào)零）。 | ||
* 推薦樣本量：10%組織勻漿, a*= 0.1~0.2ml.
3. 全血T-AOC實(shí)驗(yàn)
操作表:
樣本管 (U) (ml) | 對(duì)照管 (C) (ml) | |
Reagent 1 | 1 | 1 |
1:9全血稀釋液 | a* | |
Reagent 2 | 2 | 2 |
| Reagent 3工作液 | 0.5 | 0.5 |
| 用漩渦混合儀混勻，37℃水浴30分鐘 | ||
Reagent 4 | 0.1 | 0.1 |
1:9全血稀釋液 | a* | |
| 靜置10分鐘， 移液至比色皿（1cm light path）， 在520nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔O.D.值（用蒸餾水調(diào)零）。 | ||
* 推薦樣本量：1:9全血稀釋液, a*=0.05ml.
[實(shí)驗(yàn)原理]
生物體內(nèi)含有多種抗氧化的化合物，能將Fe3+還原成Fe2+，F(xiàn)e2+與菲羅啉反應(yīng)生成穩(wěn)定的絡(luò)合物。它可以通過測(cè)量OD值來計(jì)算T-AOC。
[說明]
1. 樣本不立即用于實(shí)驗(yàn)（如血清、血漿、組織等），可置于-80℃或低于-20℃保存。保存溫度越低樣本保存時(shí)間越長(zhǎng)。
2. 垂直加樣品和試劑，不要滴到試管表面。
3. 可加入Reagent 1后加入樣品，需充分混合。
4. 如果檢測(cè)如鼓膜組織、牙髓等微型樣本，請(qǐng)用煮沸的肥皂液徹底清潔試管。
5. 請(qǐng)選用潔凈的試管， 用于檢測(cè)T-AOC、總氨基酸、VC、Ve的試管不建議用于測(cè)定SOD、GSH-PX、ATPase等，以免試管的殘留物影響酶活性。
6. 用于T-AOC、總氨基酸、VC、Ve的試管洗滌時(shí)，先用煮沸的熱洗滌劑溶液洗滌再，再用自來水沖洗10次以上，然后用蒸餾水漂洗一次，烘干或晾干， 以避免其他酶影響測(cè)量結(jié)果。
7. 實(shí)驗(yàn)中，在37℃水浴30分鐘后試管中會(huì)出現(xiàn)一些沉積物，這些沉積物在加入Reagent 4后會(huì)消失，不會(huì)影響結(jié)果。
8. 為了使液體混合均勻，推薦使用渦流混合儀。
9. Reagent 4不易吸取，移液時(shí)，請(qǐng)緩慢吸取和加入。
10. 該試劑盒僅供體外科研和實(shí)驗(yàn)室使用。
[下載]
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