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膠質細胞系來源神經營養(yǎng)因子(GDNF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

ELISA Kit for Glial Cell Line Derived Neurotrophic Factor (GDNF)

ATF1; ATF2; HFB1-GDNF; Astrocyte-Derived Trophic Factor; Glial Derived Neurotrophic Factor

  • 膠質細胞系來源神經營養(yǎng)因子(GDNF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 產品包裝(模擬)
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  • 膠質細胞系來源神經營養(yǎng)因子(GDNF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 實驗結果圖
  • SEA043Ra.jpg 標準曲線圖
  • Certificate 通過ISO 9001、ISO 13485質量體系認證

特異性

本試劑盒用于檢測膠質細胞系來源神經營養(yǎng)因子(GDNF)，經檢測與其它相似物質無明顯交叉反應。
由于受到技術及樣本來源的限制，不可能完成對所有相關或相似物質交叉反應檢測，因此本試劑盒有可能與未經檢測的其它物質有交叉反應。

回收率

分別于定值血清及血漿樣本中加入一定量的膠質細胞系來源神經營養(yǎng)因子(GDNF)（加標樣品），重復測定并計算其均值，回收率為測定值與理論值的比率。

樣本 回收率范圍(%) 平均回收率(%)
serum(n=5) 95-105 101
EDTA plasma(n=5) 96-103 101
heparin plasma(n=5) 93-105 99

精密度

精密度用樣品測定值的變異系數(shù)CV表示。CV(%) = SD/mean×100
批內差：取同批次試劑盒對低、中、高值定值樣本進行定量檢測,每份樣本連續(xù)測定20 次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD值。
批間差：選取3個不同批次的試劑盒分別對低、中、高值定值樣本進行定量測定，每個樣本使用同一試劑盒重復測定8次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD值。
批內差： CV<10%
批間差： CV<12%

線性

在定值血清及血漿樣本內加入適量的膠質細胞系來源神經營養(yǎng)因子(GDNF)，并倍比稀釋成1:2，1:4，1:8，1:16的待測樣本，線性范圍即為稀釋后樣本中膠質細胞系來源神經營養(yǎng)因子(GDNF)含量的測定值與理論值的比率。

樣本 1:2 1:4 1:8 1:16
serum(n=5) 91-101% 90-98% 82-95% 93-101%
EDTA plasma(n=5) 78-103% 79-94% 79-95% 94-103%
heparin plasma(n=5) 81-90% 89-103% 99-105% 92-105%

穩(wěn)定性

經測定，試劑盒在有效期內按推薦溫度保存，其活性降低率小于5%。
為減小外部因素對試劑盒破壞前后檢測值的影響，實驗室的環(huán)境條件需盡量保持一致，尤其是實驗室內溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實驗員來進行操作可減少人為誤差。

實驗流程

1. 實驗前標準品、試劑及樣本的準備；
2. 加樣（標準品及樣本）100µL，37°C孵育1小時；
3. 吸棄，加檢測溶液A100µL，37°C孵育1小時；
4. 洗板3次；
5. 加檢測溶液B100µL，37°C孵育30分鐘；
6. 洗板5次；
7. 加TMB底物90µL，37°C孵育10-20分鐘；
8. 加終止液50µL，立即450nm讀數(shù)。

實驗原理

將膠質細胞系來源神經營養(yǎng)因子(GDNF)抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標準品或標本，其中的膠質細胞系來源神經營養(yǎng)因子(GDNF)與連接于固相載體上的抗體結合，然后加入生物素化的膠質細胞系來源神經營養(yǎng)因子(GDNF)抗體，將未結合的生物素化抗體洗凈后，加入HRP標記的親和素，再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的膠質細胞系來源神經營養(yǎng)因子(GDNF)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(O.D.值)，計算樣品濃度。

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參考文獻

雜志 參考文獻
?Molecular Neurobiology Efficient Generation of Functionally Active Spinal Cord Neurons from Spermatogonial Stem Cells [pubmed:27566610]
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