血管鈣化(VC)大鼠模型
Rat Model for Vascular Calcification (VC)
- 編號DSI845Ra01
- 物種Rattus norvegicus (Rat，大鼠) 相同的名稱，不同的物種。
- 原型物種Human
- 來源維生素D3(Vitamin D3) 導致
- 模式動物品系SPF級SD大鼠，健康，6~8W，雄性，體重180g-200g
- 實驗分組實驗分六組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個劑量組
- 實驗周期8 weeks
- 建模方法血管鈣化動物模型
每日維生素D3(Vitamin D3) 30萬IU/kg體重肌肉注射，連續(xù)四周；
每日尼古丁灌胃兩次：將尼古丁溶于花生油灌胃（25mg/kg），9h后再灌胃1次，連續(xù)四周。
注意事項：
維生素D3主要造成血管鈣化，尼古丁刺激心跳加速血壓升高每次灌胃完都要觀察動物狀態(tài)，老鼠灌胃后會抽搐，需要人工按壓給緩解。
血漿制備：模型制備結束，各組大鼠用戊巴比妥鈉深度麻醉大鼠，腹主動脈取血，注入含7.5%EDTA 二鈉30ul、40ul 和抑肽酶40ul 的試管中，離心分離血漿。-20℃保存待測。
組織制備：各組大鼠取血后處死，取大鼠胸主動脈段，置入4%多聚甲醛固定液中，脫水，石蠟包埋，切片，備用
病理組織進行Von Kossa染色。 - 應用疾病模型
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- 規(guī)格 每例
- 價格 ¥ 1560
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產品包裝(模擬)
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產品包裝(模擬)
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Fig.Von Kossa staining of Aortic vessels in model rat
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通過ISO 9001、ISO 13485質量體系認證
模型評價
1.血管鈣含量測定: 取10mg腹主動脈溶于硝酸消化、烤干，用含有
27nmol/LKCl和 27μmol/L LaCl3的去離子水復溶，用原子分光光度計在442.7nm
處讀取吸光度，后換算成組織鈣含量(以μmol/gdw 表示)
2.ALP活性測定：取腹主動脈勻漿，8000×g離心10 min，取上清液。考馬
斯亮藍法蛋白定量。按試劑盒說明方法測定血管組織ALP活性，紫外分光光度計
在405nm處讀取吸光度。具體步驟：加入緩沖液，370C孵育30min，NaOH終止反應，測定405nm下的吸收值。ALP活性用p2硝基苯酚為標準值計算，1單位表示30min內產生1nM硝基酚的活性。BCA法測定總蛋白定量，校正ALP活性。
組織病理學
病理組織Von Kossa染色:
取大鼠胸主動脈段，用石蠟包埋胸主動脈后切片，４μｍ厚切片，常規(guī)脫蠟、脫水。1%硝酸銀溶液浸泡，日光下照射30min后，將玻片浸入5%硫代硫酸鈉溶液1min，后用堿性品紅返染。脫水、透明、封片，用光鏡觀察。
主動脈鈣化面積百分比測算：取主動脈弓至胸主動脈段血管1cm，沿縱
軸剪開后Von Kossa 染色，用Image-Pro Plus 6.0 病理圖像分析軟件計算各實驗
組大鼠鈣化斑塊面積百分比。
免疫組化法觀察RUNX2、BMP2、RANK/RANKL/OPG水平：DAB顯
色，蘇木素復染，常規(guī)梯度乙醇脫水，中性樹膠封片觀察。陰性對照以PBS代替一抗進行染色。每只大鼠隨機取3張結腸切片，每張切片光學顯微鏡下隨機選取5個高倍視野，統(tǒng)計每個視野中陽性組織細胞的積分光密度值(IOD值)與檢測面積的比值，即平均光密度值(MOD)，以代表染色強度。
標志因子水平
Western blot 檢測RUNX2、BMP2、RANK/RANKL/OPG 蛋白表達
統(tǒng)計學分析
應用SPSS軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標準差（x ±ｓ）表示，采用ｔ檢驗，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05表示有顯
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